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环境保护与防治污染论文分光光度法测定葛根叶中总黄酮的含量


所属栏目:农业环境科学论文
发布时间:2015-04-27 15:32:20  更新时间:2015-04-27 15:04:20

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  摘 要:目的:建立葛根叶中总黄酮含量的测定方法。方法:以芦丁为对照品,选择510nm为测定波长,采用分光光度法测定葛根叶中总黄酮的含量。结果:芦丁在0.01208mg/mL-0.07248mg/mL范围内线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为98.72%,RSD为2.6%。结论:分光光度法精密度高,重复性好,可用于葛根叶中总黄酮含量的测定。

  关键词:环境保护与防治污染论文,葛根叶,总黄酮,含量测定,分光光度法

  中药葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd) Ohwi或甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根。在我国具有悠久的历史,在《本经》、《别录》等均有记载。味甘、辛、凉,归脾、胃经,具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻之功效。由于葛根具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量及降低血压等作用[1,2],含有多糖及多种微量元素[3],现已被广泛应用于保健食品中,是我国卫生部批准的第一批药食同源的植物[4,5]。临床上主要用于冠心病、高血压、心绞痛、高黏血症、脑梗死、椎-基底动脉供血不足等多种疾病的治疗。[6]目前,未见有葛根叶的相关研究报道。为了扩大葛根的药用部位,文章采用分光光度法测定葛根叶中总黄酮含量,为葛根叶的后续研究和开发打下基础。

  1 实验材料

  1.1 仪器

  TU-1818型紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);BS124S型电子分析天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司];KQ-100B型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

  1.2 药材与试剂

  葛根叶药材购于安徽省亳州市药材市场。芦丁对照品(中国生物制品检定所,批号:100080-200707)。所用试剂均为分析纯。

  2 方法与结果

  2.1 对照品溶液的制备

  精密称取芦丁对照品15.1mg,置于50mL容量瓶中,加入60%乙醇适量,溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。

  2.2 供试品溶液的制备。取葛根叶粉末5g,精密称定,置锥形瓶中,加入60%乙醇50mL,称重,超声30min,60%乙醇补足失重,滤纸过滤,取续滤液,即得。

  2.3 测定波长的选择

  精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1.0mL,置25mL容量瓶中,先加入5%的亚硝酸钠溶液1.0mL,摇匀,放置5min,再加入10%的硝酸铝溶液1.0mL,摇匀,放置5min,再加入4%的氢氧化钠溶液10.0mL,加60%的乙醇至刻度,混匀,静置l5min。以上述不加芦丁对照品液的混合液为空白参照,在200nm-800nm波长范围内扫描,确定最大吸收波长为510nm。

  2.4 方法学考察

  2.4.1 标准曲线的制备。精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,分别置于25mL容量瓶中,照“2.3”项下方法,自“加入5%亚硝酸钠溶液”起依法测定各个标准品溶液的吸光度,以吸光度A为纵坐标,浓度C为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程A=0.1529C-0.0023,r=0.9996,表明芦丁在0.01208mg/mL-0.07248mg/mL范围内呈良好的线性关系。

  2.4.2 精密度试验。精密吸取对照品溶液3.0mL,共6份,分别置于25mL容量瓶中,照“2.3”项下方法操作,测定吸光度,结果吸光度的RSD为0.98%,表明本方法精密度良好。

  2.4.3 重复性试验。取葛根叶粉末6份,按“2.2”项的方法制备供试品溶液,精密量取供试品溶液1mL,置25mL容量瓶中,按“2.3”项下的方法操作,测定吸光度,计算葛根叶中总黄酮含量的RSD值为1.3%,表明本方法重复性良好。

  2.4.4 稳定性试验。精密吸取葛根叶供试品溶液1.0mL,按“2.3”项下方法操作,在0min、5min、10min、15min、20min、30min时依法测定吸光度,RSD值为1.6%,表明本法在30min内测定是稳定的。

  2.4.5 加样回收率。精密称取已知总黄酮含量的葛根叶,分别精密加入高、中、低浓度芦丁对照品适量,照“2.3”项下方法操作,每个浓度平行三份,测定吸光度,以计算的检测量减去本底,比上加入量算得回收率,结果见表1。

  2.5 样品的测定

  取葛根叶6份,按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液,依法测定吸光度,计算得总黄酮含量9.08mg/g,RSD=1.9%。

  3 讨论

  目前关于总黄酮含量的测定方法有比色法、紫外分光光度法、薄层色谱法等,其中以比色法最常用,且多以芦丁为对照品。该法操作简便,稳定性和重现性好,因此本实验选择以芦丁为对照品的比色法为测定方法。

  在供试品的提取过程中,比较了回流提取和超声提取两种方法,结果表明回流提取效率高。同时考察了不同比例的乙醇溶剂,发现60%乙醇提取效率高。

  葛根因含葛根素,大豆苷及大豆苷元,金雀异黄素和芒柄花黄素等异黄酮类成分,近年来葛根在防治骨质疏松症方面的作用得到广泛关注。[7,8]综合国内外数据库检索的结果,未见有葛根叶的相关报道。基于同株植物含有相同化学成分的原理,对葛根叶的研究开发,有利于扩大葛根的药用部分,有利于葛根的深入开发和研究,有利于推进抗骨质疏松药物的研究。

  参考文献

  [1]姚丹,丁选胜.葛根素药理作用机制探讨及临床应用[J].中国临床药理学与治疗学,2008,13(4):468-472.

  [2]白东义,佟春玲,韩慧,等.葛根素的药理作用及其临床应用研究进展[J].江苏中医药,2009,41(3):76-78.

  [3]易红,杨华.葛根的品种产地和提取工艺研究进展概况[J].中国实验方剂学杂志,2006(11):601.

  [4]李悦,李艳菊.国内外葛根功能食品研究进展[J].食品研究与开发,2007,28(12):174-177.

  [5]李玉山.葛根的综合开发和利用[J].林产化学与工业,2009,29(6):109-114.

  [6]杨杰忠.葛根素的临床应用进展[J].中国医药指南,2012,10(21):465-466.

  [7]姚红,黄少华,苏子仁.葛根总黄酮对去卵巢大鼠骨密度及骨钙影响的实验研究[J].新中医,2005,37(2):92-93.

  [8]Wong R,Rabie B.Efect of puerarin on bone formation[J].Osteoarthritis Cartilage,2007,15(8):894-899.



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