新型复方植物消毒剂杀菌效果分析

　　大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌是常见的条件致病菌，在免疫抑制、器官移植、获得性免疫缺陷综合征等情况下，可导致机会性感染[1]，有效控制其感染的主要技术手段之一为日常消毒。随着社会的进步，人们对生活质量和环保认识的日益提高，绿色环保、易清除、使用安全、无毒无味的消毒产品成为首选。因此，由植物中具有杀菌作用的成分或提取物组成的植物消毒剂受到了人们的关注[2]。槐果碱是一种苦参碱类生物碱，在体外能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的生长，具有广谱抗菌作用[3-8];金银花是常见的植物，在我国分布广泛，其活性成分绿原酸类物质具有良好的抗菌、抗病毒及抗氧化等功效[9-11]。研究表明，不同浓度的绿原酸提取液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果可达30%～90%[12]，金银花提取物对口腔白色念珠菌也有一定的抑制作用[13]。单一植物消毒产品研发成本高、抗菌谱窄且易使细菌产生抗药性，将多种抗菌性能良好的活性成分进行复配，可有效扩大其抗菌谱，拓宽使用面[14-15]。本研究在原有工作基础上，采用复方法，将具有良好抗菌性能的槐果碱、绿原酸和金银花提取物按一定比例复配，评价其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的协同杀菌效果，并对其物理性能、杀菌能力及稳定性进行评价。

新型复方植物消毒剂杀菌效果分析

　　1材料与方法

　　1.1原料与试剂苦参提取液，槐果碱(南京泽朗医药科技有限公司，纯度>98%)，金银花(购自衡阳市敬一堂大药房)，用乙酸乙酯和稀盐酸混合溶液作提取剂，从中提取绿原酸[12];金银花提取物由上海中药制剂二厂提供。大肠杆菌(ATCC2592)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、白色念珠菌(8099，第4代)购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。1.2复方植物消毒剂的制备将槐果碱-绿原酸-金银花提取物(5∶4∶1)与3%的Tween-80混合，60℃水浴搅拌30min，然后滴入极少量三氯生乙醇溶液，加入含有苦参提取液的磷酸盐缓冲液(PBS，pH8.0)，并补加PBS至90ml，继续搅拌1h后，将上述溶液用PBS定容至100ml，即为新型复方植物消毒剂。与上述步骤相同，不添加槐果碱-绿原酸-金银花提取物，制备复合剂，作为空白对照品。1.3试验菌的制备在无菌环境下打开大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的冻干菌种管，加入适量营养肉汤轻轻吹洗数次，使菌种充分融化分散;然后取少量菌悬液滴加到5～10ml营养肉汤中，37℃培育18～24h，为第1代菌悬液。用无菌接种环挑取第1代菌悬液接种到营养琼脂平板上，37℃培育18～24h;取第2代菌落接种到营养琼脂斜面，37℃培育18～24h，得到第3代菌。将第3代菌接种于试管斜面上，37℃培养18～24h，保存于4℃冰箱。1.4定量杀灭试验1.4.1染菌样液的制备分别以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌为试验菌，配制菌悬液，含菌量为1×107～5×107CFU/ml。1.4.2中和剂鉴定试验复方植物消毒剂原液为待测消毒剂，用含0.5%硫代硫酸钠、0.3%卵磷脂、3.0%Tween-80的PBS为中和剂，作用于试验菌0.5min。试验温度20℃±1℃，重复3次。试验分为6组：(1)复方消毒剂+染菌样液;(2)复方消毒剂+染菌样液+4.5ml中和剂;(3)4.5ml中和剂+染菌样液对照;(4)复方消毒剂+4.5ml中和剂+染菌样液对照;(5)染菌样液对照+4.5ml胰蛋白胨(TPS);(6)试验所用同批次TPS。1.4.3菌悬液定量杀菌试验挑取典型菌落接种于普通琼脂培养基上，37℃培养24h，加入2～3ml无菌PBS清洗菌苔，用PBS将试验菌悬液稀释至1×107～5×107CFU/ml。20℃±1℃下，将0.5ml菌悬液与4.5ml复方消毒剂混匀，分别作用0.5、1.0、1.5min。取菌样混合液0.5ml加入4.5ml灭菌的中和剂溶液中，中和作用后取0.1ml接种于普通琼脂平板，37℃培养24h，计数菌落;同时以PBS稀释菌为阴性对照。重复3次，取平均值。根据各组活菌数(CFU/ml)计算杀菌率，杀菌率=[(对照样品平均菌落数-被试样品平均菌落数)/对照样品平均菌落数]×100%。1.5稳定性试验将制备好的复方植物消毒剂原液密封包装，置于54℃恒温箱中，存放14d。分别在存放前、存放后观察其颜色、澄清度变化及pH值，按定量杀灭试验程序检测其杀灭效果。

　　2结果

　　2.1中和剂鉴定试验在20℃±1℃条件下，用消毒剂原液对白色念珠菌进行中和剂鉴定试验，重复3次，结果如表1所示。各组平板菌落平均生长量为：第1组0CFU/ml，第2组12CFU/ml，第3、4、5组分别为1890000CFU/ml、1870000CFU/ml、1900000CFU/ml，第3、4、5组三组间误差率为0.53%。表明中和剂可有效中和最高试验浓度新型复方植物消毒剂对细菌的残余作用，且中和剂对试验菌无明显影响。2.2新型复方植物消毒剂杀菌效果新型复方植物消毒剂原液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌分别作用0.5、1.0、1.5min，结果如表2所示。新型复方植物消毒剂原液作用0.5min时，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀菌率≥99.97%;作用1min杀菌率均达到100.00%。2.3新型复方植物消毒剂的稳定性54℃存放14d后，新型复方植物消毒剂pH中性，为无不溶物的深红色澄清溶液，性状无明显改变。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌作用1min的灭杀效果，存放前为100.00%，存放后为99.99%(表3)。

　　3讨论

　　本研究采用纯植物提取物复合配方法，将绿原酸、槐果碱和金银花提取物按照一定比例复配，可充分利用三者的优良性能，有效增强了抗菌的广谱性和抑制效果[3-13]。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀灭效果良好，作用0.5min即可达到99.97%的灭杀效果;作用1.0min可全部灭杀。同时，本研究也对此新型复方植物消毒剂的颜色、澄清度、pH及杀菌性能的稳定性进行了评价，经过14d54℃的加速试验，本产品颜色、性状以及其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀菌效果不变，证明了本产品具有良好的稳定性。综上所述，此新型复方植物消毒剂具有良好的稳定性和杀菌性，能够满足抗菌、储藏等方面的要求。

　　参考文献

　　[1]万江帆，唐春萍，沈志滨，等.中药单体联用抗真菌药物抗耐药白色念珠菌的研究现状[J].中国中药杂志，2014，39(1)：28-33.

　　[2]张顺合，张维，陈春田，等.中草药在消毒领域的应用研究[J].中国消毒学杂志，2009，26(1)：64-65.

　　[3]张美玲，魏莲花，田垣.甘肃黄答、苦参、金银花体外抑(杀)白色念珠菌实验研究[J].检验医学与临床，2008，5(2)：70-71.

　　[4]戴五好，钱利武.苦参、山豆根生物碱及其总碱的抑菌活性研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(3)：177-180.

　　[5]孙磊，郭江玉，闫彦，等.苦参化学成分及其生物碱抑菌活性研究[J].辽宁中医药大学学报，2017，19(11)：49-53.

　　[6]夏鲁青，赵博光，戴丽，等.双稠哌啶类生物碱对5个环境细菌菌株的抑制作用[J].南京林业大学学报：自然科学版，2001，25(5)：81-85.

　　[7]黄干荣，李晓华.大黄素等提取物对耐药性大肠杆菌生物膜形成的影响[J].中成药，2013，35(12)：2602-2605.

　　[8]张明发，沈雅琴.苦参碱类生物碱抗菌药理作用的研究进展[J].抗感染药学，2018，15(3)：369-374.

　　作者：慈颖郭美荣杨燕李素王静王思于珊珊张晓龙

　　新型复方植物消毒剂杀菌效果分析相关推荐植物根际有机阴离子外渗功能和原理