高效液相色谱法测定小麦粉中过氧化苯甲酰

　　摘要：本文提出了用高效液相色谱仪分离和测定小麦粉中过氧化苯甲酰的新方法：用甲醇提取面粉中的过氧化苯甲酰，用硫代硫酸钠还原为苯甲酸，然后用高效液相色谱仪进行测定。该方法具有良好的准确度和再现性。
　　关键词：高效液相色谱，测定方法
　　过氧化苯甲酰是一种小麦粉增白剂，它可使面粉中由小麦胚乳产生的黄色胡萝卜素迅速完全地与之反应，使面粉增白。但由于它的还原产物苯甲酸能破坏面粉中的有些营养成分，而且人体摄人过多也不利于健康，所以国标GB2760规定其最大使用限量不得超过0.06g/kg。目前，我国法定的测定方法是气相色谱法，该方法前处理过程复杂，容易造成样品中测定成分损失，影响测定的准确性。本文用甲醇提取小麦粉中的过氧化苯甲酰，再用硫代硫酸钠还原为苯甲酸，采用高效液相色谱法进行分离和测定，具有良好的准确度和重现性，用于实际样品的测定，结果可靠。
　　1. 测定方法
　　1.1原理：小麦粉中的过氧化苯甲酰用甲醇提取后，用硫代硫酸钠还原生成苯甲酸，过滤后用高效液相色谱法仪测定，得到色谱图。以保留时间定性，以外标法定量。
　　1.2试剂：甲醇（色谱纯，天津四友）、醋酸铵（分析纯）、苯甲酸标准品（国家标物中心）、硫代硫酸钠（分析纯），实验用水为去离子水。
　　1.3仪器：北京创新通恒科技有限公司的高效液相色谱系统（包括P3000型高压输液系统、UV3000紫外/可见分光检测器、色谱数据工作站、柱温箱）
　　1.4色谱条件：
　　色谱柱：C18柱（4.6mm×250mm）
　　流动相：甲醇：乙酸铵（0.2%）（5+95）
　　流速：1.0mL/min
　　检测波长：230nm
　　进样量：20µL
　　1.5标准曲线的绘制：外标法定量，苯甲酸标准溶液采用与样品相同方法处理后进样，绘制工作曲线
　　1.6样品处理与测定
　　准确称取1.000~1.500g样品于10mL具塞试管中，加入5.00mL甲醇，混匀后静置5min。加入1.00mL10%硫代硫酸钠溶液，混匀，静置5min，使其充分反应，加4.00mL水，使总体积为10.0mL，混匀，静置。取上层清液，用0.45µm微孔滤膜过滤，作为试液供进样用。
　　1.7结果计算：
　　X=×0.992
　　式中：X——样品中过氧化苯甲酰的含量，g/kg；
　　A——进样体积中苯甲酸的含量，mg；
　　V——样品稀释液总体积，mL；
　　V1——进样体积，mL；
　　m——样品质量，g；
　　0.992——由苯甲酸换算为过氧化苯甲酰的换算系数。
　　2.结果与讨论：
　　2.1经过计算分析，色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性相关系数为0.9996，最低检出限为0.01µg。
　　2.2回收率测定
　　按照以上方法对六组小麦粉进行加标回收试验，见表1
　　表1

　　由表1可知，平均回收率为96.5%（n=5），说明用本方法测定过氧化苯甲酰的准确度较高，能够满足试验要求。
　　2.3精密度
　　按照该方法对同一样品进行6次平行测定，相对标准偏差为0.1%，见表1
　　表2

　　2.4样品测定实用：
　　采用本法，对9份实际样品进行测定，发现4份样品中过氧化苯甲酰含量超过国家规定指标，测定结果见表3。由此可见，加强对小麦粉中增白剂的加添量的控制是非常必要的。
　　表3

　　3.结论：
　　本法采用甲醇提取过氧化苯甲酰，用硫代硫酸钠还原为苯甲酸，过滤后用高效液相色谱仪测定，得到色谱图。以保留时间定性，以峰面积定量，实验结果证明，本方法样品处理方式简单，分离效果好，准确度和精密度较高，适用于小麦粉中过氧化苯甲酰的检测。